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      液相色譜儀各個(gè)分支需要注意的事項
      點(diǎn)擊次數:1899 更新時(shí)間:2020-10-12
        液相色譜儀是一種分離與分析儀器,其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相,固定相可以有多種形式,如紙、薄板和填充床等。在色譜儀發(fā)展的過(guò)程中,為了區分各種方法,根據固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名,如:紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。
        1、色譜儀氘燈:
        色譜儀開(kāi)始進(jìn)樣前30分鐘開(kāi)氘燈即可,節約燈的能量和使用時(shí)間。
        2、流動(dòng)相的使用和注意事項:
       ?、偎昧鲃?dòng)相必須預先濾過(guò)和脫氣,流動(dòng)相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內。貯存容器一定要蓋嚴,防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長(cháng)霉,應盡量新鮮配制使用,不要長(cháng)期貯存。容器應定期清洗,特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子,以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長(cháng)的微生物。
       ?、谂渲屏鲃?dòng)相用水需為純凈水或經(jīng)超聲過(guò)濾后的純化水,流動(dòng)相配制好后先用直徑為5cm,孔徑為0.45um的濾膜,通過(guò)沙芯過(guò)濾器的過(guò)濾,然后在超聲儀上超聲。
       ?、鄄坏脤⒀b流動(dòng)相的容器直接放置與超聲儀內,需放與篩網(wǎng)上進(jìn)行超聲。
        3、六通閥的使用和維護注意事項:
       ?、贅悠啡芤哼M(jìn)樣前必須用濾膜過(guò)濾,以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。
       ?、谵D動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢,更不能停留在中間位置,否則流動(dòng)相受阻,使泵內壓力劇增,甚至超過(guò)泵的Zda壓力;再轉到進(jìn)樣位時(shí),過(guò)高的壓力將使柱頭損壞。
       ?、蹫榉乐咕彌_鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,每次色譜儀分析結束后應沖洗進(jìn)樣閥。通??捎盟疀_洗,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,再用水沖洗。
        4、色譜柱柱壓升高的主要因素:
       ?、俦玫膯蜗蜷y堵塞。
       ?、谏V柱的入口篩板堵塞。
       ?、畚鼮V頭堵塞。
       ?、躊EEK管接口處堵塞。
        5、色譜柱柱壓不穩的因素:
       ?、?strong>液相色譜儀泵內有空氣。
       ?、诒妹芊鈮|損壞。
       ?、廴軇┲械臍馀?。
       ?、芟到y檢漏,找出漏點(diǎn)。
        6、樣品峰保留時(shí)間漂移的主要因素:
       ?、偈覂葴囟茸兓^(guò)大。
       ?、诹鲃?dòng)相成分發(fā)生變化。
       ?、凵V儀色譜柱未平衡好。
       ?、苌V儀泵中有氣泡。
       ?、菰摿鲃?dòng)相是否適宜此樣品的檢測。
        7、基線(xiàn)漂移的主要因素:
       ?、僦鶞夭▌?dòng)。
       ?、诹鲃?dòng)相不均勻。
       ?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。
       ?、苌V儀檢測器出口阻塞。
       ?、萘鲃?dòng)相配比不當或流速變化。
       ?、蘖鲃?dòng)相污染、變質(zhì)。
       ?、呤褂醚h(huán)溶劑。
        8、色譜儀檢測器靈敏度不夠的主要因素:
       ?、贅悠愤M(jìn)樣量不足。
       ?、诓ㄩL(cháng)設置不正確。
       ?、蹤z測器池窗污染。
       ?、軝z測池中有氣泡。
       ?、蓦妷翰环€。
       ?、蘖鲃?dòng)相流速不合適。
        9、色譜柱的使用和維護注意事項:
       ?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓叭魏螜C械震動(dòng)。柱壓的突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料,因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉動(dòng)不能過(guò)緩。
       ?、趹饾u改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/div>
       ?、垡话阏f(shuō)來(lái)色譜儀色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì )迅速降低柱效。
       ?、苓x擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。
       ?、荼苊鈱碗s的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內,需要對樣品進(jìn)行預處理或者在色譜儀進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護柱。
       ?、藿?jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質(zhì)。
       ?、弑4嫔V柱時(shí)應將柱內充滿(mǎn)乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置至次日或更長(cháng)時(shí)間。
       ?、嗌V柱使用過(guò)程中,如果壓力升高,一種可能是濾片被堵塞,這時(shí)應更換濾片或將其取出進(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內,使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
       ?、嵋怨枘z為基質(zhì)的填料,只能在pH2~9范圍內使用。色譜儀每次分析檢測完成后,*用洗脫能力強的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線(xiàn)平衡。
        10、色譜儀樣品:
        液相色譜儀樣品必須用直徑為2.5cm,孔徑為0.45um的濾膜針式過(guò)濾。如有明確要求需用離心過(guò)濾的,經(jīng)離心過(guò)濾后取上清液即可。
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