液相色譜作為一個(gè)既能用于微量組分的分析測定，又能用于大量的制備分離的儀器，具有靈活多樣的特點(diǎn)，其應用范圍已超過(guò)其他各種分離方法，尤其在中藥樣品的分析分離方面更為突出。而液相色譜在使用過(guò)程中容易出現一些問(wèn)題，如果不對這些問(wèn)題進(jìn)行解決，就可能會(huì )影響分析結果，從而影響整個(gè)實(shí)驗。因此，今天我們就來(lái)討論一下液相色譜使用過(guò)程中可能會(huì )出現的問(wèn)題。
 

　　在液相色譜使用過(guò)程中，比較常見(jiàn)的主要有柱壓異常(包括過(guò)高或者過(guò)低)、峰形異常、基線(xiàn)漂移等。下面我們就來(lái)討論一下這幾個(gè)問(wèn)題的原因和解決方法。
 

　　1、柱壓異常
 

　　柱壓異常包括過(guò)高與過(guò)低。柱壓過(guò)高是常見(jiàn)的問(wèn)題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應該分段進(jìn)行檢查。
 

　　2、峰形異常
 

　　1)所有峰均為負峰。解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；光學(xué)裝置尚未達到平衡。

　　2)所有峰均為寬峰。解決方法：系統未達到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；色譜柱尺寸及類(lèi)型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。

　　3)色譜圖中未出峰。解決方法：系統未進(jìn)樣或樣品分解；泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；檢測器設置不正確；針對以上情況成因作相應調整即可。

　　4)一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負峰。解決方法：流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。

　　5)所出峰比預想的小。解決方法：樣品黏度過(guò)大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測器設置不正確；定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問(wèn)題。

　　6)出現雙峰或肩峰。解決方法：進(jìn)樣量過(guò)大；樣品濃度過(guò)高；保護柱或色譜柱柱頭堵塞；保護拄或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

　　7)前伸峰。解決方法：進(jìn)樣量或樣品濃度高；溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強；保護柱或色譜柱污染或失效。

　　8)拖尾峰。解決方法：柱超載，降低樣品量；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾，對樣品進(jìn)行清潔過(guò)濾；調整流動(dòng)相；硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值；柱內燒結不銹鋼失效，更換燒結不銹鋼；加在線(xiàn)過(guò)濾器，對樣品進(jìn)行過(guò)濾；死體積或柱外體積過(guò)大，將連接點(diǎn)降至低；盡可能使用內徑較細的連接管；柱效下降，更換柱子；采用保護柱，對柱子進(jìn)行再生。

　　9)出現鬼峰。解決方法：進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來(lái)平衡和清洗系統；樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預處理；流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相，盡可能現配現用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過(guò)濾；盡可能使用HPLC級試劑；流路中有小的氣泡，打開(kāi)Purge閥，加大流速排除。

　　10)出現平頭峰。解決方法：檢測器設置不正確；進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。
 

　　3、基線(xiàn)漂移
 

　　一般說(shuō)來(lái)，機器剛起動(dòng)時(shí)，基線(xiàn)容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長(cháng)下(220nm)平衡時(shí)間相對會(huì )比較長(cháng)，但如果你在實(shí)驗過(guò)程中發(fā)現基線(xiàn)漂移，則你要考慮下面的原因：

　　1)流通池被污染或有氣體。解決方法：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(斷開(kāi)柱子更好)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)；

　　2)柱溫波動(dòng)。解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調對著(zhù)柱溫箱；

　　3)紫外燈能量不足。解決方法：更換新的紫外燈；

　　4)檢測器沒(méi)有設定在大吸收波長(cháng)處。解決方法：將波長(cháng)調整至大吸收波長(cháng)處；

　　5)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。解決方法：檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑；

　　6)樣品中有強保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。解決方法：使用保護柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過(guò)程中，定期用強溶劑沖洗柱子；

　　7)流動(dòng)相的PH值沒(méi)有調節好。解決方法：加適量的酸或堿調至合適PH值。
 

　　總的來(lái)說(shuō)，在遇到問(wèn)題時(shí)，需要按照排除法依次確定導致問(wèn)題的原因，之后要做的就是修正和調整并且記錄問(wèn)題，只要做好這樣的工作就不怕以后會(huì )出現問(wèn)題。